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磁珠法多糖多酚植物總RNA(plus)提取試劑盒
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試劑盒簡介:
本試劑盒利用硅羥基磁珠特異吸附核酸原理,配合特定的裂解緩沖液系統(tǒng)快速提取樣本總RNA。 廣泛應(yīng)用于植物組織和真菌。
本實驗可在1個小時內(nèi)完成, 整個提取純化過程不需要添加苯酚及氯仿等有毒試劑,可以直接用于PCR、Southern blotting等下游試驗。
實驗流程圖(資源處可下載):

部分實驗案例:
資 源
常見問題
二:(RNA)如何處理含有微量EDTA的Buffer EB在(RNA)試劑盒中?
試劑盒中Buffer EB(RNA專用)中含有少量EDTA,可能影響下游實驗,使用時適當(dāng)稀釋,如果用其他洗脫液洗脫,要確保PH>7.5,PH過低影響洗脫效率;
三:(RNA)離心柱漂洗完成后操作注意事項
離心柱漂洗完成后,盡可能烘干柱膜上殘留乙醇,殘留乙醇會影響洗脫效率和下游實驗效果;柱膜也不建議過度干燥,沒有乙醇味道殘留最好,如果過度干燥可能影響RNA溶解;如果A260/230值過低,說明樣本提取過程中漂洗不徹底,有鹽離子殘留,建議增加漂洗次數(shù);
四:RNA提取中A260/280比值分析:低于1.9的情況說明什么?
對于RNA提取,A260/280<1.9說明有可能存在DNA污染或者蛋白污染,如果洗脫樣本時沒有使用Buffer EB,而使用ddH20(確保無RNA酶),比值或偏低,因為Ph值會影響吸光值,并不表示樣本純度低;
五:如何判斷RNA的完整性
RNA完整性可以通過超微量核酸檢測儀檢測或者瓊脂糖凝膠電泳(電泳條件:膠濃度1%;1XTAE電泳緩沖液)來判斷;一般樣本RNA電泳條帶為兩條帶,對于植物樣本,有可能存在葉綠體RNA干擾,條帶數(shù)量大于4條,并不表示RNA提取發(fā)生降解;
六:如何有效防止RNA污染?
RNA容易受到環(huán)境污染導(dǎo)致RNA嚴(yán)重降解,建議實驗過程中注意更換實驗手套,使用所有耗材應(yīng)該均無RNA酶的一次性耗材;
電泳環(huán)境受到RNA酶污染,也會造成RNA降解,電泳檢測不準(zhǔn)確,確保電泳過程中電泳緩沖液,上樣緩沖液無RNA酶污染;
七:植物RNA樣本處理量差異的處理方案
對于植物樣本,樣本處理量無法統(tǒng)一確定,對于一般樣本(煙草,擬南芥等),提取量不超過100mg鮮重組織或者20mg干重組織,對于復(fù)雜樣本(水稻,玉米,榆樹等),建議初始樣本量不超過50mg鮮重或者10mg干重組織;如果需要較高的RNA量,可以采取多管濃縮的方法提取RNA;
如果離心時堵塞離心柱,建議減少初始樣本量;
八:植物RNA樣本提取試劑盒選型指南
RNA提取一般是傳統(tǒng)TRIzol方法和改進(jìn)的柱式方法;對于TRIzol法進(jìn)本可以提取大部分樣本RNA,但是對于多糖多酚植物樣本,建議使用者盡量選擇具有針對性的試劑盒(參見目錄),傳統(tǒng)TRIzol法無法有效去除多糖多酚這些次生代謝物;
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